分光光度計的精密度和準(zhǔn)確度公認(rèn)是比較高的,在實際工作中被廣泛采用,很多分析方法已被制訂成標(biāo)準(zhǔn)方法。分光光度法都可以發(fā)揮作用, 在有機(jī)分析中,紫外一可見光譜除可作定量分析外,在定性和結(jié)構(gòu)分析方面,它可作為紅外光譜。核磁共振、質(zhì)譜等方法的輔助手段。

   新儀器在啟用時,必須請計量部門進(jìn)行全面檢測。但在使用過程中,也要定期復(fù)檢。對各項性能指標(biāo)逐項進(jìn)行檢查、校正,記錄下原始數(shù)據(jù),建立起該儀器的技術(shù)檔案,供定期維護(hù)、校正時查閱。下面逐項介紹一個紫外可見分光光度計的主要性能指標(biāo)及其測試方法。

   波長重復(fù)性：用校正波長的標(biāo)準(zhǔn)樣品,在同祥條件下,每隔一定時間(如1小時)重復(fù)測量某一吸收峰位置,求出各次測量值對平均值的相對偏差,相對偏差的平均值表示波長的重復(fù)性。

   吸光度準(zhǔn)確性: 即測光精度, 是指儀器上測得的透光率或吸光度與真實值之間的偏差,該偏差越小,說明數(shù)據(jù)越準(zhǔn)確可靠, 即測光精度就越高。

   檢查測光精度通常是應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)溶液法。用堿性絡(luò)酸鉀溶液檢查測光精度，其方法是將分析純的鉻酸鉀放入105攝氏度烘箱內(nèi)烘2小時使其恒重。取出后放在干燥器中。冷卻半小時，用分析天平城區(qū)0.45g鉻酸鉀，并加入0.05N的氫氧化鉀溶液到1000ml。在25攝氏度用10mm的石英吸收池測定出吸光度。

   吸光度里復(fù)性: 在同樣條件下對某一試樣進(jìn)行多次重復(fù)測量吸光度,求得各次測量值對平均值的偏差和偏差的平均值。、

   基線的祖定性和平直性: 基線穩(wěn)定性是指不放置樣品情況下,掃描100%T和O%T線時, 讀數(shù)偏離的程度.基線平直性是指不放置樣品時,掃描100%T和0%T,基線傾斜或彎曲的程度。光學(xué)系統(tǒng)失調(diào),二光束不平衡是基線平直性不好的主要原因,儀器搬動受震,光源位置移動也會引起基線彎曲。

   光度線性范圍: 儀器的光度線性范圍,也就是儀器最佳工作范圍。在此線性范圍內(nèi)測得的物質(zhì)的吸光系數(shù)才是一個常數(shù),老式的分光光度計的光度線性范圍一般是在0.1-1.2( 吸光度)之間,現(xiàn)代的儀器遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出了這個范圍。

   光度線性范圍的檢查法是將物質(zhì)(例如重鉻酸鉀等) 配成一系列不同的濃度,測定吸光度, 根據(jù)測得的吸光度計算吸光系數(shù),以吸光度A為橫坐標(biāo),相應(yīng)的吸光系數(shù)為縱坐標(biāo)繪制吸光系數(shù)一吸光度曲線,曲線上的平坦區(qū)域即為儀器的線性范圍。

   分辨率: 紫外可見分光光度計的的分辨率是指儀器對于緊密相鄰的峰(吸收或發(fā)射)可分辨的最小波長間隔。是衡量分光光度計性能的重要指標(biāo)之一它是分光光度計質(zhì)量的綜合反映

。單色器渝出的單色的光潛純度、強(qiáng)度以及檢測器的光譜靈繁度等是影響儀器分講率的主要因素。

   分辨率低有時會使相鄰兩峰不能分開,使定性分析或結(jié)構(gòu)測定造成錯誤。分光光度法的定量分析的基礎(chǔ)是比耳定律。嚴(yán)格說來,吸光度與濃度成線性關(guān)系只能對單色光而言。

單色性差就會使定量分析結(jié)果產(chǎn)生誤差。對于雙光束紫外及可見分光光度計在260nm處。儀器應(yīng)能分辨波長間隔為0.3nm3 n m 的二條潛線，其檢查法是:

   1、將儀器量程放在0-100%檔

   2、強(qiáng)1-2滴苯液滴入1cm石英吸收池中，蓋上蓋子，放入樣品室內(nèi)。

   3、調(diào)節(jié)100%旋紐,使270nm處的透射率調(diào)到90-100%之間,然后掃描258.9nm的一組苯蒸氣的吸收峰。

   4、在記錄紙上觀察258.9nm的分辨深度,如果A值大于8%,說明儀器分辨率優(yōu)于0.3nm。